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臺(tái)式低溫高速離心機(jī)是實(shí)驗(yàn)室最常見(jiàn)的必備儀器，今天由上海趙迪技術(shù)人員向大家介紹臺(tái)式低溫高速離心機(jī)如何提取與制備蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)樣品制備

秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取按Davermal等(1986)的方法進(jìn)行。

100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巰基乙醇)，混勻，-20℃沉淀1小時(shí)，4℃，15000r/min離心15min，棄上清，沉淀復(fù)溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巰基乙醇)，再于-20℃沉淀1小時(shí)，同上離心棄上清，(有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。

     

按每mg干粉加入20μl(可調(diào))UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸鉀，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫蘇糖醇)，2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc，pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃溫育30min，期間攪動(dòng)幾次，28度(溫度低，高濃度的尿素會(huì)讓溶液結(jié)冰)16000r/min離心15min，離心力越大時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)越好！上清即可上樣電泳。或者-70度保存。

　

植物根中蛋白質(zhì)的抽取

(1)sample,液氮研磨

(2)裝1.5mlcentrifuge用tube

(3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul

(4)12000rpm,4度,10-15minite

(5)取上層液，蛋白質(zhì)就在里面

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